O Rei K. Rool roubou o esconderijo de bananas de Donkey Kong, e Donkey Kong precisa da sua ajuda para os recuperar. Em busca de K. Rool, a horda Kremling impede o seu progresso. Os Kremlings, criaturas semelhantes aos crocodilos, incluem Kritters (sucumbem a um simples salto na cabeça), Krushas (são virtualmente indestrutíveis), e outros. Há também outros inimigos que bloqueiam o seu caminho, tais como castores, cobras, abutres. À frente deles estão chefes covardes, incluindo Very Gnawty, Necky, Queen B., e Dumb Drum, e todos eles barram o caminho com a sua própria mistura especial de vilania.
A Diddy Kong junta-se a Donkey Kong: estes dois primatas diferem significativamente. Por exemplo, Donkey Kong é geralmente mais forte; pode destruir a maioria dos inimigos com um único salto e pode levantar barris directamente sobre a sua cabeça para os atirar mais longe. Por outro lado, Diddy é mais rápido e não tão forte como o Burro; ele pode correr muito rápido e fazer rodas de carroça. Diddy leva os barris à sua frente, criando um escudo contra ataques frontais.
O jogo está dividido em mundos diferentes, que estão divididos em diferentes níveis. Cada nível contém áreas de bónus, onde se pode recolher bananas, medalhões, e vidas. No final de cada mundo há um chefe, que é normalmente uma versão maior de um inimigo menor.
O jogo original Super Nintendo foi lançado mais tarde para as consolas portáteis da Nintendo. A versão Game Boy Color tem um nível exclusivo (Necky Nutmare) e jogos bónus adicionais, Funky’s Fishing e cinco minijogos Crosshair Cranky. Houve também a adição de pacotes de autocolantes de DK colecionáveis espalhados pelos níveis. Estes pacotes de autocolantes podiam ser impressos utilizando a Game Boy Printer. O jogo também tem mais duas opções de dificuldade que se tornam disponíveis após vencer o jogo. Vencer o jogo uma vez permite ao jogador desligar os barris de DK e vencer o jogo uma segunda vez permitirá ao jogador desligar os barris do posto de controlo.
A versão Game Boy Advance também tinha jogos bónus adicionais. Tem uma versão de Funky’s Fishing, mas em vez dos jogos temáticos de mira, existe agora o Candy’s Dance Studio, que hospeda seis jogos de dança. Há também as adições de um modo de ataque temporal chamado DK Attack, um modo de dificuldade mais difícil chamado Hero Mode (só pode jogar como Diddy Kong e o jogo já não oferece barris e checkpoints de Donkey Kong ao longo dos níveis), e a ideia do livro de autocolantes da versão Gameboy Color foi substituída pela recolha de imagens de álbuns de recortes.






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